NGHIÊN CỨU LỰA CHỌN QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT DNA TỔNG SỐ ĐỂ NGHIÊN CỨU ĐA DẠNG NẤM MEN BẰNG CHỈ THỊ PHÂN TỬ RAPD

Tóm tắt

Trong nghiên cứu đa dạng, các chỉ thị phân tử DNA như RAPD, RFLP, STR có ưu thế hơn các chỉ thị hình thái, sinh lí, sinh hóa do chúng không phụ thuộc vào điều kiện môi trường sống và dinh dưỡng của sinh vật. Tuy nhiên, thành công của việc sử dụng chỉ thị phân tử DNA thường phụ thuộc đáng kể vào chất lượng DNA thu được từ phương pháp chiết DNA tổng số sử dụng. Trong nghiên cứu này, DNA tổng số của các mẫu nấm men phân lập từ mật và sáp ong tự nhiên ở Sơn La, Việt Nam, được tách chiết theo quy trình củaLõoke và của da Silva-Filho. Kết quả được so sánh với quy trình tách chiết DNA tổng số sử dụng kit thương mại của Norgen Biotek™. Mẫu DNA tổng số thu được từ hai phương pháp trên đều đạt nồng độ (40 – 3300 ng/µL) cao hơn hoặc bằng quy trình sử dụng kit Norgen Biotek™. Các mẫu DNA này đều đạt chất lượng cần thiết để thực hiện thành công phản ứng PCR-RAPD với mồi M13 và (GTG)₅. Việc lưu giữ các mẫu DNA tách chiết bằng hai phương pháp này trong 3 tháng ở -20˚C không ảnh hưởng đến kết quả của phản ứng PCR-RAPD. Quy trình của Lõoke được khuyến cáo sử dụng để tách chiết DNA tổng số cho phản ứng PCR-RAPD do tính tiện lợi, tiết kiệm thời gian, công sức và hóa chất.