XÂY DỰNG VÀ XÁC NHẬN HỆ THỐNG CRISPR/CAS9 NHẮM ĐÍCH GENE Os.eIF4AIIa Ở LÚA (Oryza sativa)

Nguyễn Vũ Bão; Nguyễn Thị Mai; Nguyễn Thị Thu Ngà; Chu Hoàng Mậu

doi:10.34238/tnu-jst.14529

XÂY DỰNG VÀ XÁC NHẬN HỆ THỐNG CRISPR/CAS9 NHẮM ĐÍCH GENE Os.eIF4AIIa Ở LÚA (Oryza sativa)

Thông tin bài báo

Ngày nhận bài: 14/01/26 Ngày hoàn thiện: 29/05/26 Ngày đăng: 01/06/26

Các tác giả

1. Nguyễn Vũ Bão , Trường Đại học Sư phạm - ĐH Thái Nguyên
2. Nguyễn Thị Mai, Trường Đại học Nông Lâm - ĐH Thái Nguyên
3. Nguyễn Thị Thu Ngà, Trường Đại học Sư phạm - ĐH Thái Nguyên
4. Chu Hoàng Mậu, Trường Đại học Sư phạm - ĐH Thái Nguyên

Tóm tắt

Yếu tố khởi đầu dịch mã eIF4A là một DEAD-box RNA helicase đóng vai trò quan trọng trong điều hòa dịch mã và đáp ứng stress ở thực vật, tuy nhiên chức năng của Os.eIF4AIIa ở lúa vẫn chưa được làm rõ. Nghiên cứu này nhằm xây dựng và xác nhận hệ thống chỉnh sửa gene CRISPR/Cas9 nhắm đích gene Os.eIF4AIIa để phục vụ phân tích chức năng gene. Một sgRNA dài 20 nt, liền kề PAM AGG, đặc hiệu được thiết kế nhắm vào vùng mã hóa nằm trước motif DEAD (motif II), là miền xúc tác bảo tồn của DEAD-box RNA helicase. Cassette sgRNA được lắp ráp dưới sự điều khiển của promoter U3 và tích hợp vào vector CRISPR/Cas9 pUbi-Cas9 thông qua hệ thống Gateway LR. Kết quả xác nhận phân tử cho thấy vector tái tổ hợp tạo 2 băng DNA sau xử lý SmaI, trong khi vector trống tạo 3 băng DNA. Giải trình tự cho thấy trình tự sgRNA thu được khớp 100% với thiết kế ban đầu. Vector CRISPR/Cas9 mang sgRNA Os.eIF4AIIa được duy trì ổn định trong Escherichia coli và Agrobacterium tumefaciens. Nghiên cứu này đã thiết lập thành công công cụ chỉnh sửa hệ gene nhắm đích Os.eIF4AIIa, tạo nền tảng cho các nghiên cứu tiếp theo nhằm làm sáng tỏ vai trò của gene này trong sinh trưởng và đáp ứng stress ở lúa.

Từ khóa

Os.eIF4AIIa; CRISPR/Cas9; DEAD-box RNA helicase; Chỉnh sửa hệ gene; Lúa (Oryza sativa)

Toàn văn:

PDF

Tài liệu tham khảo

[1] M. Sumithra et al., “An overview of global rice production, supply, trade, and consumption,” Annals of the New York Academy of Sciences, vol. 1324, no. 1, pp. 7-14, 2014.

[2] N. Aslam et al., “Integrated review of transcriptomic and proteomic studies to understand molecular mechanisms of rice’s response to environmental stresses,” Biology, vol. 13, no. 9, 2024, Art. no. 659.

[3] N. Tuteja, A. A. Vashisht, and R. Tuteja, “Translation initiation factor 4A: A prototype member of DEAD-box protein family,” Physiology and Molecular Biology of Plants, vol. 14, no. 1, pp. 101-107, 2008.

[4] O. Cordin et al., “The DEAD-box protein family of RNA helicases,” Gene, vol. 367, pp. 17-37, 2006.

[5] M. S. Bush et al., “The RNA helicase eIF4A-1 is required for ovule development and cell size homeostasis in Arabidopsis,” The Plant Journal, vol. 84, no. 5, pp. 989-1004, 2015.

[6] V. Tyagi et al., “The DEAD-box RNA helicase eIF4A regulates plant development and interacts with the hnRNP LIF2L1 in Physcomitrella patens,” Molecular Genetics and Genomics, vol. 295, no. 2, pp. 373-389, 2020.

[7] X. Zhang et al., “eIF4A, a target of siRNA derived from rice stripe virus, negatively regulates antiviral autophagy by interacting with ATG5 in Nicotiana benthamiana,” PLoS Pathogens, vol. 17, no. 9, 2021, Art. no. e1009963.

[8] G. Galicia-Vázquez et al., “A cellular response linking eIF4AI activity to eIF4AII transcription,” RNA, vol. 18, no. 7, pp. 1373-1384, 2012.

[9] J. Miao, D. Guo, J. Zhang, Q. Huang, G. Qin, X. Zhang et al., “Targeted mutagenesis in rice using CRISPR-Cas system,” Cell Research, vol. 23, no. 10, pp. 1233-1236, 2013.

DOI: https://doi.org/10.34238/tnu-jst.14529

Các bài báo tham chiếu

Hiện tại không có bài báo tham chiếu



Ghi nhớ