NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN NHANH VI KHUẨN Salmonella spp. TRÊN NỀN MẪU THỊT BẰNG PHƯƠNG PHÁP LOOP MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION (LAMP)
Thông tin bài báo
Ngày nhận bài: 09/06/20                Ngày hoàn thiện: 31/07/20                Ngày đăng: 31/07/20Tóm tắt
Salmonella là một trong những vi khuẩn gây ra ngộ độc thực phẩm và phân lập ở hầu hết thực phẩm. Mục tiêu của nghiên cứu này là thiết lập được quy trình phát hiện nhanh vi khuẩn Salmonella spp. trên nền mẫu thịt bằng phương pháp Loop Mediated Isothermal Amplification (LAMP) đặc hiệu với gen invA, đáp ứng yêu cầu ứng dụng phân tích. Kết quả nghiên cứu đã xây dựng được quy trình phân tích trực tiếp Salmonella từ mẫu thịt dựa trên phản ứng LAMP, bao gồm: (1) tăng sinh mẫu (25 g) trong môi trường (150 ml dung dịch đệm pepton: 75 ml canh thang RVS), trong thời gian 10 giờ trên nền mẫu thịt tươi; cải tiến phương pháp tách chiết nhanh thu DNA từ dịch tăng sinh mẫu thực phẩm đó là sử dụng đệm NaOH 100 mM, gia nhiệt 5 phút tại 95°C, siêu âm 30 giây, ly tâm 10.000 vòng/phút trong 2 phút thu dịch DNA cho phản ứng LAMP. Kết quả nghiên cứu cho thấy phương pháp được xây dựng có độ đặc hiệu (SP) đạt 94%; độ chính xác (AC) đạt 94%; độ nhạy (SE) đạt 100%; tỷ lệ âm tính giả 0% và tỷ lệ dương tính giả 6%, LOD50 là 3 CFU/25g. Hiệu quả phân tích Salmonella bằng phương pháp LAMP được được xây dựng tương đương với phương pháp nuôi cấy theo TCVN 10780-1:2017 (ISO 6579-1:2017) trên nền mẫu thịt nhưng có kết quả cho thời gian phân tích ngắn khoảng 10 giờ.
Từ khóa
Toàn văn:
PDFTài liệu tham khảo
[1]. P. A. Kokkinos, P. G. Ziros, M. Bellou, A. Vantarakis, “Loop-Mediated Isothermal Amplif ication (LAMP) for the Detection of Salmonella in Food,” Food Analytical Methods, vol. 7, pp. 512-526, 2014.
[2]. T. Notomi, H. Okayama, H. Masubuchi, T. Yonekawa, K. Watanabe, N. Amino, and T. Hase, “Loop-mediated isothermal amplification of DNA,” Nucleic Acids Research, vol. 28, no. 12, p. 7, 2000.
[3]. C. C. Boehme, P. Nabeta, G. Henostroza, R. Raqib, Z. Rahim, and M. Gerhardt, “Operational feasibility of using Loop-mediated isothermal amplification for diagnosis of Pulmonary tuberculosis in microscopy centers of developing countries,” Journal of Clinical Microbiology, vol. 45, pp. 1936-1940, 2007.
[4]. S. Chen, F. Wang, J. C.Beaulieu, R. E. Stein, and B. Ge, “Rapid detection of viable Salmonellae in produce by coupling propidium monoazide with Loop-mediated isothermal amplification,” Applied Environmental Microbiology, vol. 77, no. 12, pp. 4008-4016, 2011.
[5]. K. Rahn, S. A. De Grandis, R. C. Clarke, S. A.McEwen, J. E.Galan, C. Ginocchio, R. 3rd. Curtiss, and C. L.Gyles, “Amplification of an invA gene sequence of Salmonella Typhimurium by polymerase chain reaction as a specific method of detection of Salmonella,” Molecular and Cellular Probes, vol. 6, no. 4, pp. 271-279, 1992.
[6]. TCVN 10780-1:2017 (tham khảo ISO 6579-1:2017), Microorganisms in the food chain - Methods of detection, quantification and determination of serum serotypes of Salmonella - part 1: method for detection of Salmonella spp, National Standard.
[7]. M. A. Ramakrishnan, “Determination of 50% endpoint titer using a simple formula,” World Journal of Virology, vol. 5, no. 2, pp. 85-86, 2016.
[8]. ISO 16140:2003, Microbiology of food and animal feeding stuffs- Protocol for the validation of alternative methods, International Organization for Standardization.
[9]. J. E.Galan, C. Ginocchio, and P. Costeas, “Molecular and functional characterization of the Salmonella invasion gene invA: homology of InvA to members of a new protein family,” Journal of Bacteriology, vol. 174, no. 13, pp. 4338-4349, 1992.
[10]. M. E. Ohl, and S. I. Miller, “Salmonella: A model for bacterial pathogenesis,” Annual Review of Medicine, vol. 52, pp. 259-274, 2001.
[11]. Q. Yang, F.Wang, K. L. Jones, J. Meng, W. Prinyawiwatkul, and B. Ge, “Evaluation of loop-mediated isothermal amplification for the rapid, reliable, and robust detection of Salmonella in produce,” Food Microbiology, vol. 46, pp. 485-493, 2015, doi: 10.1016/j.fm.2014.09.011.
Các bài báo tham chiếu
- Hiện tại không có bài báo tham chiếu